蓝耳病毒核酸测序选择疫苗？没有指导意义！

　　由于蓝耳弱毒苗在国内广泛使用，使得猪场对蓝耳病毒感染状况的判断变得不那么准确和容易。鉴别野毒还是疫苗毒是一种理想的方法用来准确判断猪场的病毒传播现状，从而有助于最终实现疾病净化。但目前还没有简便成熟的鉴别方法。虽然可以通过病毒核酸测序大体区分野毒还是疫苗毒，但对于防控直接意义不大，而通过抗体检测的鉴别方法仍在研究当中。由于蓝耳病的特性，谈净化也为时尚早，从疫病防控的长远角度看，可鉴别野毒的新型疫苗和鉴别技术依然是各大科研单位和高校研究的重要方向之一。

　　核酸测序可鉴别野毒，但对临床意义不大

　　蓝耳病病毒（PRRSV）变异较快，临床上多种毒株并存，同一个猪场也可能分离出几个毒株。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究员田志军调查发现，2013年以来分离到的PRRSV有远离高致病性蓝耳病病毒（HP-PRRSV）的趋势，表现为基因同源性降低。多数毒株与HP-PRRSV同源性在96-98%之间，一个地域内PRRSV分离株表现为多样性等。由于我国市场上同时存在几种毒株的疫苗，让猪场难以抉择，因此一些猪场也热衷于毒株的核酸测序，希望能确切的知道本场的流行毒株，来指导选择疫苗。但实际上，这样做的意义并不大。

　　广东省农业科学院动物卫生研究所研究员向华告诉记者，尽管PRRSV的同源性有所降低，但亲缘性依然很高。几种变异株疫苗虽然命名不同，但差异并不大，交叉保护效果依然很好。毒株测序可以作为选择疫苗株的参考，但也不必夸大其作用，疫苗的选择还是要综合考虑。他认为测序对病毒进化情况的监测、新疫苗毒株的筛选等研究意义更大。

　　据介绍，目前实验室通过PCR方法就可以对毒株进行初步判断。针对PRRSV基因组保守片段设计引物，用PCR方法进行核酸检测。如果样本扩增产物与目的基因相一致，基本可以判定为经典株，如果扩增产物比目的基因短，缺少90个碱基，则基本可以判定为变异株。而天津株由于传代过程中比变异株又缺失了260个碱基，由此可以鉴别出是天津株疫苗毒还是野毒。

　　抗体检测鉴别野毒尚无可靠方法

　　据了解，目前国际上还没有成熟可靠的鉴别野毒抗体的方法，但可鉴别野毒的新型疫苗和鉴别技术依然是各大科研单位和高校研究的重要方向之一。目前的抗体检测方法可以通过经验分析猪群大概的感染状况。哈尔滨维科生物技术开发公司猪病技术服务专家夏伟介绍说，通过检测猪群血清的阳转或者测定PRRSV特异抗体滴度的上升，同样可以用于PRRSV感染的诊断。

　　针对以往有过感染史或已经注射了疫苗的猪群，血清学结果的判定应该慎重。因为到目前为止，任何一种血清方法还无法区分血清学的阳性结果是由野毒感染还是由于疫苗免疫所引起。另外，血清学方法也无法确定猪群感染的时间，只有将血清学结果与流行病学结合起来才能做出准确的判断。当对某个猪群进行调查诊断时，有必要将其它的方法如PCR或病毒分离与血清学结果综合起来，这样才能对生产实践中PRRS的传播特点有个清晰的了解。行业人士告诉记者良好免疫群典型的S/P值范围在0.7-1.8之间，当种猪群的S/P值高于2.5可能提示猪群正处于野毒感染病毒血症期间，而达到3.5时可能表明猪群正处于急性感染阶段，因为通常疫苗免疫S/P值不会这么高。

　　另外从抗体水平变化规律也可进行分析，如果抗体变化符合疫苗免疫的消长规律，表明疫苗免疫效果良好，猪群稳定。如果出现突然的波峰变化，则可能是这一时期有野毒感染，由此可以作为调整免疫程序的参考，在这一时期加强免疫。

　　“能不能做出这样一个疫苗，免疫之后能够通过血清学普通的ELISA方法、简单的设备条件就能快捷的鉴定出抗体是疫苗免疫产生的还是野毒感染产生的。”中国农业科学院上海兽医研究所研究员童光志正在对可鉴别野毒新型蓝耳病疫苗进行研究。通过这种双标记疫苗配合抗体检测试剂盒就可以实现对猪场一批猪或者整个猪群内野毒的流行情况的明确掌握，参照检测结果，制定下一阶段的蓝耳病防控策略。

　　据介绍，双标记疫苗研发的技术基础是感染性克隆病毒拯救技术，以HuN4-F112（HuN4毒株在细胞上连续传代112代得到的弱毒）这个弱化的疫苗毒序列构建感染性克隆。利用基因工程技术手段先把蓝耳病病毒nsp2基因片段上的某个区域敲除，然后插入一段禽新城疫病毒的基因序列。因为禽新城疫病毒的易感动物只能是禽类，不能跨种间传播，所以猪体内原本不可能存在新城疫病毒的抗体。所以，可以利用这个插入的禽新城疫病毒基因产生的抗体来检测疫苗的免疫情况，这是标记Ⅰ。标记Ⅱ则是HuN4-F112病毒基因被敲除的区域产生的抗体，只有野毒感染的情况下才可能出现。通过普通的ELISA方法，就可以清楚的检测出两种抗体的水平，从而判定猪群的状态（表1）。

　　从理论上讲，鉴别野毒的目的是为了实现疫病净化。比如伪狂犬疫苗，由于gE基因缺失，依靠抗体检测试剂盒即可准确判断是否存在野毒感染，逐步淘汰野毒感染的种猪，配合防控措施即可实现猪群的净化。但PRRSV野毒在猪群中普遍存在，目前也没有完美的蓝耳病疫苗，向华认为现在谈蓝耳病的净化为时尚早。

　　《农财宝典》新牧网记者 孟轩