18厂家同台竞技 拿什么评价圆环苗？

　　近年来，国内外科学家一直致力于PCV2疫苗的开发应用研究，并已取得了较大的成效。据南京农业大学姜平教授介绍，目前国内市场PCV2疫苗主要有全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗两种，亚单位疫苗进口厂家1个，国产灭活疫苗厂家16个，共有17个厂家的产品。据他透露，由于国产灭活疫苗专利已经进入第二轮转让，近期即将有11个厂家的灭活疫苗，1家大肠杆菌表达的亚单位疫苗和2家杆状病毒表达的亚单位疫苗进入市场。截稿时，青岛易邦亚单位疫苗已可在中国兽药信息网查询。届时将总共31个厂家的PCV2疫苗产品竞争市场。另据消息称，梅里亚和硕腾的进口圆环疫苗也在积极申报国内注册。由于国内圆环疫苗评价标准还未成熟，厂家为了在激烈的竞争中脱颖而出，宣传的产品标准也不一而同，对此，许多猪场养户表示很难选择，困惑很多。

　　不能迷信TCID50

　　据记者了解，PCV2难培养，抗原浓度低是一个众所周知的问题。由于PCV2在细胞中的滴度较低，因此如何提高疫苗产量和抗原剂量是该类疫苗得以大规模应用的关键。生产中通过驯化和筛选适应PCV2生长的细胞系，建立高密度培养技术，以及浓度浓缩等手段来解决这些问题。

　　有效抗原含量是衡量疫苗质量的一项基本内容。对于全病毒疫苗来说，半数组织细胞感染量（TCID50）是表达病毒量的指标之一，产品说明书上都会标明TCID50的滴度，厂家在宣传上也会围绕这个数量级做文章。

　　对此，姜平表示TCID50只是全病毒灭活疫苗抗原含量的一种表示方法，病毒滴度的测定方法很重要，不同测定方法、方法是否标准对结果影响差异很大。另外他认为，TCID50不能绝对的来反映疫苗的免疫源性，疫苗的免疫源性用最小免疫剂量来衡量更科学。

　　中国农业科学院哈尔滨兽医研究所刘长明研究员也认为，TCID50只能评价疫苗生产中半成品状态下的病毒滴度，在灭活过程中可能会出现抗原含量降低、失活等情况，对于成品质量评价没有直接意义，只能作为参考。

　　浙江大学动物科学院邢钢博士介绍说，疫苗质量的评估主要分为半成品（灭活前）抗原含量的检测和成品抗原含量的测定。通常使用TCID50（IFA、IMPM）、RT-PCR、蛋白含量等方法进行标定。其中采用TCID50的方法进行评价的时候，由于不同种毒在不同细胞系上面的感染率差别很大，普通PK细胞感染率在20%-30%，但使用克隆化的细胞感染率可达到90%以上。因此TCID50不能作为通用的标准来衡量抗原含量，疫苗生产规程中标准也不尽相同，有的甚至相差200倍。

　　对于成品抗原的测定方法，邢钢介绍说，主要集中在与抗原性直接相关的Cap蛋白含量标定上。可采用的方法有胶体金快速检测试剂盒以及双抗体夹心ELISA法。检测之前，需要对已经乳化的疫苗进行破乳处理，提取目标蛋白。双抗体夹心ELISA法则是以Cap标准品制作标准曲线，然后将不同疫苗的检测结果进行对比，分析有效抗原含量。他认为标准曲线法是目前比较公认的能够反映疫苗质量的标准之一。

　　对于亚单位疫苗也是以Cap蛋白的含量来评价抗原含量。刘长明介绍说，Cap蛋白含量虽然可通过电泳进行相对准确的测定，但重组蛋白也存在失活和变性的问题，目前只能测出总的蛋白含量，并不能对蛋白的免疫活性进行区分。

　　测抗体水平是成品疫苗质控标准

　　据刘长明介绍，圆环疫苗生产规范中规定的成品疫苗质控标准就是免疫阴性仔猪测抗体水平。取5头PCV2阴性仔猪，间隔3周免疫两次待测疫苗，第二次免疫后2周采血测抗体效价，如抗体效价达800倍以上则视为合格产品。他表示，测抗体水平还是比较确实有效的疫苗评价标准，猪场也可自行操作，对比几种疫苗免疫后的抗体水平，但需要注意的是必须严格选用阴性猪做实验，否则就没有意义了。

　　邢钢也建议，除了实验室检测方法，临床试验检测疫苗效果可以分析抗体水平变化。通常在14日龄、56日龄和90日龄进行三次抗体检测。母源抗体在仔猪出生1周左右达到峰值，6周开始降到保护线以下，分析8周龄抗体水平与抗原免疫效果密切相关。而一般推荐的圆环病毒首免日龄在2-3周，免疫后3周产生保护效果，可避免6周龄后母源抗体降低时的感染风险。抗体水平整齐，离散度低，说明免疫效果良好。另外猪群的整齐度和死淘率等生产指标也是评价圆环病毒效果的指标。

　　姜平介绍了另一种评价体系，仔猪攻毒保护试验和小鼠参考疫苗检验系统。小鼠抗体免疫试验中，将免疫待检疫苗小鼠产生的抗体水平与免疫参考疫苗小鼠产生的抗体相比较，高于参考疫苗的为合格，否则为不合格。参考疫苗是指通过猪体免疫试验，检验合格的疫苗产品。他认为圆环疫苗质量检验采用仔猪攻毒保护试验，试验猪的标准有待规范和提高。刘长明解释到，由于目前圆环病毒普遍存在，阴性猪比较难找，小鼠不存在圆环病毒，但对外源抗原依然会产生免疫反应，小鼠抗体水平变化与抗原含量存在相关性，也是很有意义的研究方向。

　　猪场更看重生产成绩

　　据《农财宝典》广东圆环疫苗市场调查报告数据显示，绝大多数的养殖户认为，理想的圆环疫苗应该是能提高仔猪的健康程度，并且令育肥猪的生长速度加快。英德市金旭畜牧有限公司曹场长告诉记者，他们场在选择圆环疫苗时，主要就是看效果。他们会拿出2-3批猪（1000头）左右，进行免疫效果的对比试验，比较抗体水平和生产成绩后作出选择。他表示，虽然厂家宣传很多概念，但是他们不是很在乎。肇庆市大旗猪场李场长告诉记者，他们关注圆环疫苗新产品的上市，但不会轻易更换疫苗。据他介绍，如果有换疫苗的打算，场里会先小范围试用。而且猪场在选择的时候会首先考虑周围猪场和同行的使用经验。

　　刘长明介绍，目前一些大场都会在选择圆环疫苗时做一些生产性能的对比试验。打疫苗和不打疫苗，分组免疫不同厂家疫苗，然后对比生产数据，包括料肉比、出栏时间等，然后根据数据进行选择。这需要非常详细的生产记录，一般管理环节比较薄弱的小规模猪场可能比较难做，可参考附近的区域示范场来选择。

　　《农财宝典》-新牧网记者 孟轩

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