揭秘！圆环基因工程苗如何借腹生子

　　猪圆环病毒病是猪的一种免疫抑制性疾病，分为两个血清型：PCV1和PCV2，在猪群感染非常普遍。除本身引起损失外，还易使猪继发其他疾病如猪蓝耳病、副猪嗜血杆菌病。圆环病毒对环境抵抗力强，传播广泛，很难消灭。我国目前发病异常严重，该病不仅能引起仔猪发病出现PMWS，还能引起保育猪和育肥猪皮炎肾病综合征。还会对母猪的生殖系统产生影响，从而导致母猪的生产性能低下。

　　亚单位疫苗安全、高效、应激小

　　至今为止，疫苗免疫是防控圆环病毒唯一手段。但是要取得好的防疫效果，首先要选择安全性好、高效持久的疫苗，进行合理的免疫。而基因工程亚单位疫苗，安全高效，应激小，是猪圆环防疫的未来和方向。目前世界上主要的猪肉生产国美国、加拿大等基本上都是用亚单位疫苗控制猪圆环病。

　　目前国内外圆环疫苗主要分为全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗两种。全病毒灭活疫苗是使病毒完全失活，没有侵染性，但仍然有抗原性，能刺激机体产生抗体，安全性高。但此方法需要多次进行机体免疫，且该病毒在细胞上增殖滴度很低，因此此疫苗效果不佳。亚单位疫苗是利用微生物的某种表面结构成分制成不含有核酸，但能诱发机产生抗体的疫苗。当前PCV2亚单位疫苗多采用大肠杆菌、杆状病毒或酵母表达系统。

　　历经基因改造、发酵工程、蛋白提取而成

　　青岛易邦在国内首先应用大肠杆菌表达系统生产PCV2亚单位疫苗—易圆净。“易圆净”是国际上第一个成功采用大肠杆菌表达系统表达的具有病毒样颗粒（VLPS）抗原结构的兽用疫苗。

　　大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、安全性好、目的基因表达水平高、培养周期短、易于放大生产等特点，适用于中小分子量的蛋白表达。该表达系统能精确生产出具有良好免疫原性的圆环病毒蛋白（CAP/VLPs），不仅能产生很好的细胞免疫还能产很好的中和抗体，从而兼顾紧急接种和长期保护的双重功效。

　　易圆净的生产集合了基因工程、发酵工程、蛋白提取工程三大工程的成果，首先利用基因工程构建工程菌，然后利用发酵工程实现工程菌高密度发酵培养与诱导，实现了目的蛋白的高效可溶性表达。蛋白提取工程对表达产物进行多级纯化和杂质或异物的去除。

　　大肠杆菌是一种最常使用的蛋白质高效表达原核宿主菌。但是，PCV2的Cap蛋白编码序列ORF2中含有高比例的稀有密码子。在某些区域里稀有密码子成簇分布，会严重影响蛋白的表达量，甚至提前终止翻译。因此，必须利用基因工程手段将ORF2全基因进行剪切和修饰。

　　另外大肠杆菌诱导表达外源PCV2的cap蛋白多以包涵体的形式存在，这也是许多专家Cap蛋白表达失败的原因之一，易邦公司在研发过程中对表达条件进行优化，从表达菌株、更改密码子、更改诱导条件等几个方面进行系统优化后实现了Cap蛋白可溶性表达。

　　VLPs——基因工程的完美呈献

　　基因工程，又称转基因工程或重组DNA技术，就是人类按照自身的需要和旨意，用类似工程设计的方式，人为地、有目的地、有计划地通过基因克隆，转染及表达等方式塑造人们所需要的生物工程菌（毒）或细胞。青岛易邦公司研发的猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗就是基因工程的典型代表。利用大肠杆菌为载体来表达猪圆环2型病毒的Cap蛋白，并能形成典型病毒样颗粒（VLPs），这是蛋白表达的最理想状态。病毒样颗粒（Virus-Like Particles；VLPs）是由病毒结构蛋白自行折叠装配而成的类似病毒粒子的完整结构，因此保持了病毒抗原蛋白的天然构象，具有很好的免疫原性和生物学活性，可诱导良好体液免疫和细胞免疫。

　　抗原含量稳定易检测配以水佐剂易免疫

　　表达的Cap蛋白形成了在电子显微镜下可见的病毒样颗粒（VLPS），这与商品化的人用戊型肝炎VLP疫苗达到了同样的效果。病毒样颗粒抗原（VLPS）有以下特点：1、表达的病毒样颗粒抗原（VLPS）与天然的病毒有着极其相似的形态和空间结构，具有很强的免疫原性，但不含有核酸，无感染性，非常安全。2、表达的病毒样颗粒抗原（VLPS）进入机体后，它可通过与病毒自然感染一样途径来刺激机体的免疫系统，高效诱导机体产生很强的体液和细胞免疫。3、表达的病毒样颗粒抗原（VLPS）稳定性好，不易失活，在蛋白提纯处理过程中仍保持完整的病毒样颗粒和抗原性。同时易圆净商品苗的抗原含量高达100ug/ml，抗原含量真实，简单易测。猪群攻毒保护试验证明，对5个批次的猪群攻毒后进行免疫组化试验（IHC)和荧光定量PCR（Real-time PCR)，均表明该疫苗的保护率可达100%。临床试验证明易圆净免疫后15-20天，猪群100%转阳，持续时间可达5个月以上。

　　佐剂对疫苗的效果也有重大影响，目前的全病毒灭活苗均采用油性佐剂，存在不同程度的应激。而易圆净采用水性佐剂，安全性高、注射方便、无副反应。

　　同时加入免疫增效剂COPOLYTM，能显著增强机体的细胞免疫效果，真正实现了体液免疫和细胞免疫的双重功效。

　　历经5年的研发，易圆净的生产工艺可谓登峰造极、炉火纯青。自易圆净推出至今1000多万头猪临场使用表明：易圆净安全、高效、无副作用，免疫猪各项生产性能良好。只需一针，保护至出栏。

　　青岛易邦生物工程有限公司